试剂产品

¢ 产品规格

¢ 产品组分

¢ 产品简介

溶酶体绿色荧光染色试剂盒(Lyso-Tracker Green)是一种以Lyso-Tracker Green 为荧光探针，可用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。

LysoTracker Green DND-26 为绿色荧光标记的弱碱性溶酶体探针，其中仅弱碱部分提供质子，以维持pH在中性，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。

Lyso-Tracker Green是嗜酸性荧光探针，用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征，包括高度选择靶向酸性细胞器和在纳摩尔浓度有效标记活细胞。Lyso-Tracker Green必须在极低浓度(通常约50nM)下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留(retention)机制虽然没有被研究清楚，但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关，Lyso-Tracker Green探针的内吞作用动力学研究显示染料进入活细胞的摄入时间仅几秒即可。然而，这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化，长期孵育会诱使溶酶体pH值的增加。因此，建议成像前用探针孵育细胞的时间不能太久。Lyso-Tracker Green探针具体使用浓度和孵育时间需要根据自身 实验条件和具体细胞种类来进行摸索以达到满意的染色效果。

Lyso-Tracker Green 的最大激发波长为504 nm，最大发射波长为511 nm。

¢ 保存条件

-20℃避光保存，有效期一年。

¢ 使用方法

1. 试剂准备

1.1 Lyso-Tracker Green染色工作液配制

1)  按每1µl Lyso-Tracker Green (1mM)加入10/20 mL检测缓冲液的比例稀释Lyso-Tracker Green，混匀后即为Lyso-Tracker Green染色工作液。对于6、12、24、96孔板，每孔所需的染色工作液(Working Solution)的用量分别为1 mL、500 μL、200 μL和50-100 μL。其它培养器皿的Lyso-Tracker Green染色工作液的用量按需配置。

注1.配制Lyso-Tracker Green染色工作液时注意避光，且须现配现用，不能长期保存。

2.检测缓冲液也可用细胞培养液代替，但培养液中不能含有血清，否则会影响Lyso-Tracker Green的染色效果。

3.染色工作液中Lyso-Tracker Green的最终浓度推荐为50-100 nM，实际浓度需根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化。

2. 悬浮细胞样本处理

1） 取适量细胞600×g室温离心5min，弃上清，加入适当体积的 Lyso-Tracker Green 染色工作液重悬细胞。

2）置于 37℃、5% CO₂细胞培养箱中避光孵育30-60分钟。

3） 孵育结束后，600×g 4℃离心5分钟，弃上清（注意避免吸走细胞沉淀）。

4） 加入适量细胞培养液/Assay Buffer重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光酶标仪或流式细胞仪分析。

3. 贴壁细胞样本处理

3.1  荧光显微镜 / 激光共聚焦显微镜直接观察

1) 吸除 6 孔板中细胞培养液，用 PBS 轻柔洗涤 1-2 次。

2) 加入 1mL Lyso-Tracker Green 染色工作液，轻轻晃动培养板使液体均匀覆盖细胞。置于 37℃、5% CO₂细胞培养箱中避光孵育 30-60 分钟。

3) 加入 1mL 37℃预热的Assay Buffer/完全细胞培养液（培养液中可以含有血清和酚红），用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜或荧光酶标仪进行观察或检测。

注1.如果染色效果欠佳，可以提高Lyso-Tracker Green 染色工作液浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。

4. 结果判读与仪器参数

4.1  标准仪器参数设置

4.2  结果判读标准

1)  正常细胞：Lyso-Tracker Green在溶酶体内聚集发出明亮的绿色荧光。

¢ 注意事项

1) 所有染色操作需在避光条件下进行，避免荧光淬灭。

2) 染色完成后需在30 分钟内完成检测，检测前样本需置于冰浴中保存。

3) Lyso-Tracker Green 染色缓冲液需在无菌环境中使用，微生物污染会严重影响染色效果。

4) 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！

5) 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。