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产品简介

本产品BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒可用于细胞或组织碱性磷酸酶系统的免疫组化、原位杂交及 Western Blot 显色检测、细胞或组织内源性碱性磷酸酶显色。碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase)常被称作碱性磷酸酶（AP），是一类水解酶，BCIP/NBT是碱性磷酸酶的最佳底物组合之一。在AP的催化作用下，BCIP被水解生成不溶性吲哚衍生物，氧化态NBT与吲哚衍生物反应，被还原成蓝紫色不溶性沉淀物，对比度高、背景干扰小。该反应体系中，每个AP分子可催化大量BCIP水解，生成足量沉淀，实现低丰度靶标的高灵敏度检测。

本BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒不含致癌性物质，可用于细胞或组织碱性磷酸酶系统的免疫组化或原位杂交显色，也可以用于Western Blot等结合有碱性磷酸酶的膜的显色检测，也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酶的显色，也可与其他颜色的显色试剂如棕黄色的DAB显色试剂或红色的AEC显色试剂搭配使用，实现多重免疫组化标记。用于免疫组化或原位杂交时，按照每个样本使用50 μL显色液，本试剂盒共可检测至少200个样本。

保存条件

冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期12个月。

操作流程

1)         对于组织切片或细胞样品或WB蛋白转印膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或探针孵育后，TBS充分洗涤，一般清洗3次，每次5 min。不得使用磷酸盐缓冲液，会抑制碱性磷酸酯酶的活性。

2)         BCIP/NBT工作液配制：每1 mL BCIP/NBT稀释液中加入4 μL 250×NBT原液、4 μL 250×BCIP原液，混匀备用。需现配现用，不建议长期保存。

3)         将BCIP/NBT工作液直接滴加在处理好的组织切片或细胞样品或WB蛋白转印膜上，一般避光显色3-30 min或更长时间，直至显色至预期效果。

4)         去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次终止显色反应。

5)         染核（可选）：滴加核固红染色液至组织切片或细胞样品上，孵育5-10 min后，流水冲洗干净。

6)         封片：使用水性封片剂（如甘油明胶）封片，避免有机溶剂溶解沉淀。

 注意事项

1)         BCIP和NBT对光敏感，需避光配制（如铝箔包裹或棕色管保存），现配现用。溶解后的试剂建议分装-20℃保存，避免反复冻融。

2)         使用BCIP/NBT染色工作液时，避免使用磷酸盐缓冲液和含NaN₃的缓冲液，会抑制AP酶的活性。

3)         BCIP/NBT显色完成后不能经有机试剂如酒精，二甲苯等处理，否则易褪色导致实验失败。

4)         BCIP/NBT显色阳性为蓝紫色，建议用红色的核固红复染细胞核，形成蓝红鲜明对比，便于结果观察。

5)         操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。为了您的自身安全，实验前请做好有效防护。

6)         本产品对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入。

7)         本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

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