产品规格

产品简介

海肾荧光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化腔肠素氧化成腔肠酰胺。在腔肠素氧化的过程中，会产生蓝光（峰值约在466nm）。可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。

海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒是一种以腔肠素-h为底物来检测海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase，简称Renilla luciferase)活性的试剂盒，具有发光强度高、稳定性好的特点。

 保存条件

海肾荧光素酶报告基因细胞裂解液和海肾荧光素酶检测缓冲液-20℃保存，有效期12个月。海肾荧光素酶检测底物(100X)，-20℃避光保存，有效期6个月。

产品组成

使用方法

1.裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a.对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考下表加入适量报告基因细胞裂解液。

注：如果荧光素酶的表达水平比较低，可以尝试使用更少的裂解液，例如6孔板的每孔用量可以最小为100微升。
b.充分裂解后，10,000-15,000×g离心3-5分钟，取上清用于测定。
注：细胞裂解后可以立即测定荧光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。

2.融解海肾荧光素酶检测缓冲液，并达到室温。海肾荧光素酶检测底物(100X)置于冰浴或冰盒上备用。
3.按照检测每个样品需100微升检测工作液的量，配制适量海肾荧光素酶检测工作液。按照1:100的比例混合适量海肾荧光素酶检测底物(100X)和海肾荧光素酶检测缓冲液，即配制成海肾荧光素酶检测工作液。例如，1毫升海肾荧光素酶检测缓冲液中加入10微升海肾荧光素酶检测底物(100X)充分混匀后即可配制成约1毫升海肾荧光素酶检测工作液。

4.按仪器操作说明书开启化学发光仪或具有检测化学发光功能的多功能酶标仪，可以将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒，或者根据仪器设备的要求并根据实验需要设置适当的间隔时间和测定时间。
5.每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升；如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量宜保持一致)，取等体积的报告基因细胞裂解液作为空白对照。
6.加入100微升海肾荧光素酶检测工作液，用枪打匀或用其它适当方式混匀2分钟后测定RLU (relative light unit)。

注意事项

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3.本试剂盒的海肾荧光素酶检测缓冲液在反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，混匀后直接使用，经测试通常不会影响后续的检测效果。

4.检测时需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。

5.海肾荧光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于额定规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至额定规格，并混匀后即可使用。

6.海肾荧光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以短暂保存。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。

7.为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入海肾荧光素酶检测工作液。