产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价(元) |
痕量样本全蛋白组富集试剂盒 | PER01 | 24 T | 1200 |
PER02 | 96 T | 4800
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产品简介
在蛋白质组学研究中，痕量样本（如微量细胞、体液等）的全蛋白组分析常面临低丰度蛋白检出难、样本需求量大的挑战。本试剂盒采用自主研发的高效蛋白富集新材料，可在一管内完成蛋白捕获、裂解、烷基化、酶解等关键步骤，极大减少样本损失和非特异性吸附，显著提升痕量样本的蛋白检出率和质谱分析灵敏度。适用于50–5000个细胞/μL的微量样本处理，是珍贵样本蛋白质组学研究的理想选择。
产品组成及保存条件
组分 | 组分名称 | 24T规格 PER01 | 96T规格 PER02 | 主要功能 | 保存条件 |
组分A | Protein Enrichment reagent | 0.1 mL | 0.4 mL | 蛋白质提取 | 4 ℃保存，有效期1年 |
组分B | Solution Buffer | 0.25 mL | 1 mL | 杂质清洗 | 4°C保存，有效期1年 |
组分C | Lysis /Binding Buffer | 0.125 mL | 0.5 mL | 细胞裂解，烷基化 | -20 ℃保存，有效期1年，避免反复冻融 |
组分D | Trypsin | 0.05 mg/mL 0.05mL | 0.05 mg/mL 0.2mL | 蛋白质酶解 | -20°C保存，有效期1年，避免反复冻融 |
使用方法
1，需自备试剂和耗材：
自备仪器与试剂 | 说明 |
低吸附移液器吸头，0.5 mL无菌无酶EP管 | 减少提取过程中蛋白质损失 |
恒温混匀仪或其他等效设备 | 提供裂解、烷基化、蛋白质富集、酶解等步骤的恒温及震荡条件 |
脱盐枪头，推荐使用Ziptip (Millpore) 脱盐柱 | 肽段脱盐 |
封口膜 | 减少加热及酶解过程中蛋白质损失 |
冷冻离心机 | 蛋白质提取 |
真空浓缩机或其他等效设备 | 脱盐后肽段浓缩 |
1X磷酸盐缓冲液(PBS) | 细胞稀释 |
甲酸(FA) | 终止酶切 |
三氟乙酸(TFA)、乙腈(CAN)、质谱水 | 肽段切除 |
2.操作步骤
(1) 样本准备：使用少量PBS将样品稀释至50-5000个细胞/μL。
(2) 细胞裂解：取5 μL组分C (Lysis /Binding buffer)加入到0.5 mL无菌无酶EP管中。取1 μL的细胞悬液加入装有5 μL组分C (Lysis /Binding buffer)的管中，使用封口膜密封，95 ℃加热30 min，取出管后瞬时离心使液体聚集在EP管底部。将EP管置于超声仪内，超声处理60 min，使细胞完全裂解，核酸完全降解，取出管后瞬时离心使液体聚集在EP管底部。
注：加热与酶解步骤请使用封口膜密封，超声时置于冰水浴中，防止管体破裂。
(3) 烷基化：60 ℃加热1 h，取出管后瞬时离心使液体聚集在EP管底部。
(4) 蛋白提取：加入4 μL组分A (Protein Enrichment reagent)，使用低吸附枪头吹打均匀，1000 rpm震荡10 min以充分富集蛋白。然后在20000 g下离心10 min，弃上清。取8 μL组分B (Solution Buffer)重悬蛋白混合物，清洗杂质。
注： 组分A Protein Enrichment reagent使用前请超声并震荡混匀。
(5) 蛋白酶解：加入2 μL组分D（胰蛋白酶Trypsin），37 ℃酶解12-16 h。酶解结束后加入终浓度为1 %的甲酸FA终止酶解反应，并进行超声（＜5 min），接着在20000 g下离心10 min收集上清中的多肽。
(6) 脱盐：①脱盐柱处理：首先用脱盐枪头（Ziptip）吸取10 μL 100 % 乙腈活化Ziptip，弃去废液，重复2次。接着吸取10 μL 0.1 % TFA清洗Ziptip，弃去废液，重复2次。②加载样本：使用Ziptip在样品中反复吹吸7-10次使样本全部加载到脱盐柱中。③清洗脱盐柱：吸取0.1 % TFA清洗枪头，重复2次。④样本洗脱：吸取10 μL 50 % 乙腈，收集样本并在样本中反复吹吸7-10次。⑤使用真空浓缩仪浓缩样本后保存在-80 °C冰箱。
注意事项
1，为了您的自身安全，实验前请做好有效防护；
2，本试剂盒的保存，按照各组分的不同保存条件进行保存；
3，本试剂盒的实验操作推荐使用低吸附耗材，减少蛋白损失；
4，本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内！