产品规格
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 售价（元） |
增强型ATP检测试剂盒 Enhanced ATP Assay Kit | EAP001 | 200T | 1000 |
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产品简介
本试剂盒根据萤火虫荧光素酶（firefly luciferase，也称荧光素酶）催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比从而高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本试剂盒ATP的最低检测浓度为0.1 nM，线性范围为0.1 nM-10 μM。
产品特点
样品制备简单
灵敏度高，线性范围宽，在0.1 nM至10 µM范围内有良好检测效果；
读数稳定：在开始反应后 10 分钟内化学发光无明显下降；
使用方便快捷：通常 10-20 个样品可以在 30-60 分钟内测定完毕。
产品组成
组分编号 | 组分名称 | 规格 |
EAP001-A | ATP检测试剂 | 20 mL |
EAP001-B | ATP检测裂解液 | 100 mL |
EAP001-C | ATP标准溶液（0.5 mM） | 0.1 mL |
保存条件
干冰运输；-20℃ 保存，12 个月有效。
使用说明
1.样品测定的准备：(注意：样品裂解需在4℃或冰上操作)
对于贴壁细胞：
吸除培养液，按照6孔板每孔加入200 μL裂解液的比例(即相当于细胞培养液量 2 毫升的1/10)加入裂解液，裂解细胞。
裂解后4℃ 12000g离心 5 分钟，取上清，用于后续的测定。（选做）
对于悬浮细胞：
用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔的细胞量加入200 μL裂解液的比例加入裂解液，裂解细胞。
裂解后4℃ 12000g离心5分钟，取上清，用于后续的测定。（选做）
对于组织样品：
按照每 20 mg 组织加入约 100-200 μL裂解液的比例加入裂解液，然后用玻璃匀浆器或其它匀浆设备进行匀浆。充分匀浆可以确保组织被完全裂解。裂解后 4℃ 12000g 离心5分钟，取上清，用于后续的测定。
注：裂解后样品中的ATP可在-20℃保存至少一周。
2.标准曲线测定的准备：
冰浴上融解待用试剂，把ATP标准溶液用ATP检测裂解液稀释成适当的浓度梯度。具体的浓度需根据样品中ATP的浓度而定。初次检测可以检测 0.01、0.03、0.1、0.3、1、3和10 μM这几个浓度，在后续的实验中，可以根据样品中 ATP 的浓度对标准品的浓度范围进行适当调整。
编号 | 裂解液体积（μL） | ATP体积 | 最终浓度（μM） |
A | 98 | 从 ATP 标准溶液（0.5 mM）中取 2 μL | 10 |
B | 70 | 从A管取30 μL | 3 |
C | 90 | 从A管取10 μL | 1 |
D | 90 | 从B管取10 μL | 0.3 |
E | 90 | 从C管取10 μL | 0.1 |
F | 90 | 从D管取10 μL | 0.03 |
G | 90 | 从E管取10 μL | 0.01 |
3.ATP检测工作液的配制：
按照每个样品或标准品需100 μL ATP检测工作液的比例配制适当量的ATP检测工作液。把待用试剂在冰浴上融解。
4.ATP浓度的测定：
a.加100 μLATP检测工作液到检测孔或检测管内。室温放置 3-5 分钟，以使本底性的ATP全部被消耗掉，从而降低本底。可以一次性把 10-20 个检测孔或检测管分别加上100μLATP检测工作液，从而节省时间。
b.在检测孔或检测管内加上20 μL样品或标准品，迅速用枪(微量移液器)混匀，至少间隔2秒后，用化学发光仪(luminometer)或液闪仪测定RLU值或CPM。(注：样品的体积可以自行在10-100 μL范围内调节。如果样品中的ATP浓度比较低则可以加入50-100 μL样品，如果样品中ATP浓度比较高则可以加入较小体积的样品，同时标准品也需要使用相同的体积。如果样品中ATP的浓度特别高，可以用ATP检测裂解液稀释样品后再测定。
注意事项
1.本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，为取得良好的使用效果，可以进行分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染；
2.荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和ATP检测试剂均需平衡至室温后再进 行测定。请勿室温存放；
3.检测时需使用适合于细胞培养的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明 的 96 孔板或 384 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰；
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套。
5.本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
实验数据：
*博鹭腾试剂盒检测的发光信号在30 min内保持稳定
*在0.1 nM至10 µM范围内有良好检测效果